重组卡介苗热休克蛋白70的纯化及内毒素去除的效果评价

摘要

目的:表达、纯化重组卡介苗热休克蛋白70(BCG HSP70)并去除其中的内毒素.方法:采用10 L发酵罐经IPTG诱导表达含有重组表达质粒pET28a/HSP70的BL21(DE3)工程菌(pET28a/HSP70/BL21),SDS-PAGE检测BCG HSP70的表达.超声破碎菌体,裂菌后上清依次经过Ni Sepharose 4B亲和层析、TritonX-114洗涤、Superdex C-25凝胶过滤层析、Q-Sepharose FF离子交换层析进行纯化.SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,Lowry法检测蛋白浓度,37℃水浴孵育0～4 h检测纯化蛋白的稳定性,鲎试剂法检测内毒素含量.结果:工程菌pET28a/HSP70/BL21在发酵表达3 h后获得96 g湿菌,其中相对分子质量约为70 000的蛋白约占菌体总蛋白量的29.6%;表达产物纯化后在相对分子质量约70 000处可见特异性条带,该分子质量蛋白约占总蛋白量的96.5%;纯化后蛋白浓度约1.2 g·L~(-1);37℃水浴中放置4 h后相对分子质量为70 000的蛋白约占总蛋白量的95.1%;纯化产物内毒素含量<0.01 EU·μg~(-1).结论:成功表达、纯化了重组BCG HSP70,并有效地去除了其中的内毒素.