干扰苹果酸酶3对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响

摘要

目的:研究苹果酸酶3(malic enzyme 3,ME3)对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响。方法:将干扰质粒sh-ME3或对照质粒sh-EGFP转染到人脑胶质瘤LN229细胞中,用实时定量PCR、蛋白质印迹法检测干扰效率。蛋白质印迹法检测线粒体的融合与分裂指标及细胞凋亡相关蛋白;用荧光探针检测线粒体膜电位。结果:与对照组相比,实验组ME3的mRNA表达水平下降了76%(t=20.16,P<0.01),蛋白表达也相应减少。转染干扰质粒sh-ME3后,线粒体分裂相关的线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission 1 protein,Fis-1)和动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,DRP1)表达增高,而线粒体融合相关的线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,Mfn2)、视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy 1,OPA1)表达降低;线粒体膜电位降低;细胞凋亡相关的水解型半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase-3)表达增加,而B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达降低。结论:干扰ME3促进了胶质瘤细胞线粒体的分裂,抑制了其融合,降低了膜电位,从而引起细胞凋亡。