H2-calponin在食管鳞癌中的表达及意义

摘要

目的:探讨H2-钙调理蛋白(H2-calponin)在食管鳞癌中的表达及意义。方法:免疫组化技术检测30例食管鳞癌患者癌组织及癌旁组织芯片中H2-calponin的表达水平;体外培养人食管鳞癌ECA109、TE-1细胞株和正常食管上皮Het-1a细胞;荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测食管鳞癌细胞株中H2-calponin的表达;将食管鳞癌TE-1细胞分为空白对照组(常规培养)、阴性对照组(转染空载体siRNA)和H2-calponin siRNA组(转染H2-calponin siRNA),采用蛋白质印迹法测定细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、内皮生长因子-A(VEGF-A)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)蛋白的表达;ELISA法测定各组细胞培养上清液中MMP-2,MMP-9和VEGF-C含量;荧光定量PCR检测NF-κB通路抑制剂PDTC处理前(0 h)及处理后0.5,1,2,4,8,12 h H2-calponin mRNA的表达;蛋白质印迹技术检测H2-calponin及NF-κB通路蛋白的表达。结果:免疫芯片结果显示,食管鳞癌组织中H2-calponin表达量低于癌旁组织,H2-calponin阳性表达率与食管鳞癌患者性别、年龄、肿瘤部位及病理分级之间无明显相关性(P均>0.05);荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,食管鳞癌细胞中H2-calponin表达明显低于正常食管细胞(P<0.01);下调H2-calponin表达后,PCNA、E-钙黏蛋白和VEGF-A表达无明显变化,而波形蛋白、MMP-2、MMP-9和VEGF-C表达明显增加;ELISA结果显示,MMP-2、MMP-9和VEGF-C分泌量明显增加(P<0.05);PDTC处理后可显著增加IκBα的蛋白表达进而恢复并上调H2-calponin的表达(P<0.01)。结论:NF-κB通路通过抑制H2-calponin表达保证波形蛋白,MMP-2,MMP-9,VEGF-C持续表达,促进食管鳞癌细胞侵袭、转移发生。