LncRNA ABHD11-AS1在Erastin诱导的胰腺癌细胞铁死亡中的作用及其机制

摘要

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)α/β-水解酶结构域蛋白11的反义链1(α/β-hydrolase domain containing protein 11-antisense strand 1,ABHD11-AS1)在Erastin诱导的胰腺癌细胞铁死亡中的作用及其潜在机制。方法:通过GEPIA平台分析ABHD11-AS1在胰腺癌中的表达和患者预后。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测人胰腺癌PANC1、MIApaca-2和PaTu8988细胞中ABHD11-AS1表达,CCK8法计算Erastin半数抑制浓度(IC_(50))。在PANC1细胞中过表达ABHD11-AS1,分别转染pcDNA3.1、pcDNA3.1-ABHD11-AS1质粒;在PaTu8988细胞中干扰ABHD11-AS1表达,分别转染siControl、siRNA1、siRNA2,qRT-PCR检测转染效率,分别予以对照(0μmol/L Erastin)、Erastin(IC_(50)浓度)处理,CCK8法检测细胞活性,ELISA法检测丙二醛和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;另在pcDNA3.1-ABHD11-AS1和siRNA1组加入Erastin的同时加入铁死亡挽救剂Ferrostatin-1,坏死挽救剂Necrostatin-1或凋亡挽救剂Z-VAD-FMK,CCK8法检测细胞活性;免疫印迹法检测5组胰腺癌细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)以及磷酸化mTOR(p-mTOR)表达水平。结果:胰腺癌组织中ABHD11-AS1表达水平明显高于癌旁组织,高表达ABHD11-AS1组患者预后较差(P<0.05)。ABHD11-AS1相对表达量由低到高依次是人胰腺癌PANC1、MIApaca-2和PaTu8988细胞,Erasin IC_(50)趋势与ABHD11-AS1表达量相同,依次是2.245、11.760、17.120μmol/L。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-ABHD11-AS1组细胞活性及GSH含量明显增高,而丙二醛含量明显降低(P<0.05);与siControl组相比,siRNA1组和siRNA2组细胞活性及GSH含量明显降低,丙二醛含量明显增高(P均<0.05)。仅Ferrostatin-1可以挽救pcDNA3.1-ABHD11-AS1和siRNA1组细胞活性(P<0.05)。过表达ABHD11-AS1可促进mTOR活化,增强GPX4表达(P<0.05);而干扰ABHD11-AS1则相反。结论:LncRNA ABHD11-AS1可通过活化mTOR促进GPX4表达,从而促进胰腺癌细胞铁死亡抵抗。