鲤浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒三重PCR检测方法的建立及初步应用

摘要

鲤浮肿病毒(Carp Edema Virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Kio Herpes Virus,KHV)皆可感染锦鲤,对锦鲤养殖造成严重危害。本研究旨在建立一种可同时检测CEV和KHV的三重PCR检测方法。参考日本学者Oyamatsu等建立的nest-PCR方法和锦鲤疱疹病毒行业标准SC/T 7212.1—2011《鲤疱疹病毒检测方法第1部分:锦鲤疱疹病毒》,分别选取扩增CEV P4a基因的548 bp片段,KHV TK基因的409 bp片段和KHV Sph基因的292 bp片段的3对特异性引物进行组合,考虑多重PCR扩增过程中的影响因素,优化退火温度和引物浓度,进行敏感性和特异性试验。结果显示,该方法能特异地扩增出3条目的条带,大小分别是548 bp、409 bp和292 bp,最佳退火温度为53℃,引物浓度均为0.3μmol/L。该方法对CEV和KHV的检测限均为300 copies/μL,同时与其他水生动物病毒均无交叉反应。因此,本研究建立的方法可用于锦鲤样品中CEV和KHV的快速检测。