CDK2干扰RNA对人肝癌细胞HepG_2细胞周期和增殖的影响

摘要

目的:探讨CDK2 siRNA对人肝癌细胞株HepG2细胞CDK2 mRNA表达及其对HepG2细胞周期和增殖的影响。方法:利用脂质体转染法将特异性的携带绿色荧光蛋白的CDK2干扰RNA的重组质粒PGenesil-1-CDK2导入HepG2细胞,同时设立阴性对照空载体转染组PGenesil-1-HK。G418筛选稳定表达细胞株扩增培养。并用倒置荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM),分别检测转染后的HepG2细胞CDK2 mRNA和细胞周期的变化,噻唑蓝(MTT)法检测癌细胞生长增殖率。结果:经1mo的G418筛选得到稳定表达细胞株,与阴性对照组及空白对照组相比,转染组CDK2 mRNA水平明显下降,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞。结论:RNA干扰技术可明显抑制CDK2基因的表达,引起HepG2细胞周期阻滞及肿瘤细胞生长抑制作用,为CDK2介导的肿瘤基因沉默疗法提供实验依据。