青光安颗粒剂含药血清对RGC5细胞损伤模型线粒体自噬及相关蛋白的影响

摘要

目的 观察青光安颗粒剂含药血清对视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cells-5,RGC-5)损伤模型中线粒体自噬和相关蛋白的影响.方法 将14只大鼠随机分为空白对照组(3只)和青光安组(11只).青光安组灌胃青光安颗粒剂,空白对照组灌胃同等剂量的生理盐水,1次/d,灌胃7 d,第7天灌胃后提取含药血清和空白血清.培养RGC-5细胞,用谷氨酸毒性模拟青光眼所造成的神经细胞损伤,CCK8法筛选合适的含药血清和谷氨酸浓度.细胞分组为正常细胞组、空白血清组(谷氨酸+空白血清)、含药血清组(谷氨酸+含药血清)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+空白血清组(谷氨酸+3-MA+空白血清)、3-MA+含药血清组(谷氨酸+3-MA+含药血清组).细胞培养24 h后,荧光共定位检测线粒体自噬发生情况;Western blot检测微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)中LC3-Ⅱ/LC3-I、溶酶体相关膜蛋白1(lysosome associated membrane pro-tein1,LAMP1)蛋白的表达.结果 通过CCK8结果筛选,确定谷氨酸最佳的作用浓度为20 mmol/L,空白血清和含药血清的作用浓度均为20％.与空白血清组相比,含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组的溶酶体含量显著降低(P<0.05).与空白血清组相比,含药血清组、3-MA+空白血清组和3-MA+含药血清组中LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与3-MA+空白血清组相比,3-MA+含药血清组中LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达水平水平显著降低(P<0.05).结论 青光安颗粒剂含药血清对青光眼损伤的保护作用可能通过抑制细胞的线粒体自噬,调控LAMP1和LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白的表达,从而起到对RGCs的保护作用.