用PCR扩增裸甲藻和微小原甲藻rRNA基因的方法研究

摘要

以赤潮种裸甲藻(Gymnodiniumsp.)和微小原甲藻(Prorocentrumminimum)为试验材料,以不同方法提取 其基因组并进行纯化,然后采用PCR方法扩增其rRNA基因,包括18S,28S和ITS片断,并进行扩增条件的比较和优化,得到两种藻的最佳DNA提取条件和PCR扩增条件.裸甲藻和微小原甲藻的DNA提取宜采用改良的CTAB 方法;并需对粗提取的DNA用CTAB方法进行纯化.两种藻的最适模板浓度为纯化后模板1 0～2.0μL;最适Mg2+ 浓度为2 0μL(25mmol/L);ITS引物PCR扩增的退火温度为50℃,而18S三对引物的退火温度均为55℃,28S的退 火温度为54℃最为适宜.