人MAGE-3基因片段的克隆与测序

摘要

目的:克隆表达人MAGE-3基因片段(210～623位碱基),以便研究其对MAGE-3阳性恶性肿瘤的生物学作用.方法:为选择靶基因,采用分子生物学软件分析MAGE-3基因抗原表位;并设计MAGE-3靶区域引物.从人肺癌组织标本中提取mRNA,用RT-PCR法从中扩增出MAGE-3片段,对其进行XhoⅠⅡ酶切鉴定;将扩增片段克隆于pGEM-Teasy载体中,转化JM109,进行阳性筛选后,运用pGEM-T Easy质粒的T7/SP6作为引物对重组子鉴定,并进行DNA测序.结果:抗原表位分析表明:MAGE-3基因片段(210～623位碱基)为抗原决定簇丰富区段.RNA体外扩增得到的片段为414bp,并经XhoⅠⅡ酶切鉴定得到证实;pGEM-T Easy-MAGE-3经筛选鉴定正确,DNA测序结果与Genebank比较完全相同,表明靶基因成功插入pGEM-Teasy.结论:该片段可用于真核及原核表达.