猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30毒株与JXA1-R疫苗株荧光定量PCR鉴别检测方法的建立及应用

摘要

为鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株,根据类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株非结构蛋白2(Nsp2)基因序列差异,设计特异性引物和探针,建立TaqMan荧光定量PCR和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法.结果显示,2种方法中,标准品在103～108拷贝/μL均具有良好线性关系,标准曲线R2值均在0.990以上;基于TaqMan探针法的荧光定量PCR方法,JXA1-R株、HNhx株的最低检出量分别为104、103拷贝/μL,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的最低检出量均为100拷贝/μL;重复性分析结果显示,批内和批间试验的变异系数均小于1.5％,呈现出良好重复性.综上,成功建立了鉴别检测类NADC30毒株HNhx和JXA1-R疫苗株的方法,且稳定性好、特异性强,可以为PRRSV的鉴别检测提供技术支持.