鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建和鉴定

摘要

构建鸡胚成纤维细胞(CEF)T7噬菌体表达型cDNA文库,为筛选和研究CEF上病毒受体分子奠定基础.提取纯化CEF的mRNA,反转录合成双链cDNA,补平末端,连接EcoR Ⅰ/HindⅢ接头,双酶切,凝胶过滤层析除去小于400bp的cDNA片段,合成双链cDNA定向与T7噬菌体左右臂连接,体外包装后建成cDNA表达文库.测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小.结果表明,构建的cDNA文库滴度为2.2×107pfu/mL、扩增后滴度为3.5×1010pfu/mL,重组效率达98%、插入片段多在0.4～3 kb之间,平均插入片段长约1.3 kb.表明所建文库具有很高的质量,从而为筛选目的cDNA克隆奠定了基础.