停乳链球菌ISP基因的克隆与表达及其免疫原性研究

摘要

根据GenBank报道的停乳链球菌免疫分泌蛋白基因(immunogenic secreted protein,ISP)序列设计引物,PCR扩增得到1 550bp的isp片段,其基因序列与GenBank提交序列的同源性为98.13%.将isp基因与表达载体pET-25b(+)连接,成功构建重组质粒pET-25b(+)-isp.转化大肠杆菌BL21(DE3),成功得到阳性表达重组菌株BL21(pET-25b(+)-isp).经IPTG诱导后,SDS-PAGE与Western blot检测得到约55ku的目的蛋白.经优化确定,isp蛋白的最优表达条件:1mmol/L IPTG,37℃诱导18h,且此时表达的蛋白具有良好的抗原性.该研究制备了奶牛乳房炎停乳链球菌的基因工程疫苗,并对其免疫原性进行了探究,为奶牛乳房炎的免疫防治奠定了基础.