阿格列汀通过miR-497-5p/GPLD1信号通路抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化的研究

摘要

目的探究阿格列汀对高糖诱导的小鼠心肌成纤维细胞(mouse cardiac fibroblasts,MCFs)纤维化的影响及其作用机制。方法使用5.50、25.00 mmol/L葡萄糖处理MCFs细胞,设为低糖组和高塘组。阿格列汀(0.05、0.10、0.20μmol/L)治疗高糖诱导的MCFs细胞6 h,筛选最适浓度0.10μmol/L。使用脂质体法将mimics-NC组(转染mimics-NC)、miR-497-5p组(转染miR-497-5p)、anti-NC组(转染anti-NC)、anti-miR-497-5p组(转染anti-miR-497-5p)、si-NC组(转染si-NC)、si-糖基磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D,GPLD1)组(转染si-GPLD1)、阿格列汀+mimics-NC组(转染mimics-NC)、阿格列汀+miR-497-5p组(转染miR-497-5p)、阿格列汀+miR-497-5p+pcDNA组(共转染miR-497-5p和pcDNA)、阿格列汀+miR-497-5p+pcDNA-GPLD1组(共转染miR-497-5p和pcDNA-GPLD1)转染至MCFs细胞,并用25.00 mmol/L葡萄糖或0.10μmol/L的阿格列汀处理。蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)实验、实时荧光定量聚合酶链式反应(real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、胶原Ⅰ(collagenⅠ,ColⅠ)、ColⅢ的蛋白表达及miR-497-5p、GPLD1的表达。双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与NG组相比,HG组MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ的蛋白表达显著升高,miR-497-5p显著降低(P<0.05),而阿格列汀(0.10、0.20μmol/L)呈浓度依赖性显著抑制高糖诱导的MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白升高和miR-497-5p的降低。过表达miR-497-5p后,高糖诱导的MCFs细胞中α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达均明显降低,并且miR-497-5p抑制野生型GPLD1细胞的荧光活性,负向调控GPLD1蛋白表达。敲减GPLD1具有与过表达miR-497-5p相似的抑制高糖诱导MCFs细胞α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达的作用。过表达GPLD1则能够显著削弱阿格列汀和过表达miR-497-5p对高糖诱导MCFs细胞α-SMA、ColⅠ、ColⅢ表达的抑制作用。结论阿格列汀可抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞的纤维化,其机制与调控功能miR-497-5p/GPLD1信号通路有关。