姜黄素通过miR-146a抑制NF-κB信号通路保护大鼠糖尿病肾病的机制研究

摘要

目的 探讨姜黄素对糖尿病肾病肾脏损伤的保护作用及机制研究.方法 将SD大鼠随机分为对照组(N组)、糖尿病肾病模型组(DN组)和姜黄素干预治疗组(CT组).干预治疗4周后,检测各组大鼠肾脏组织的病理改变以及Nephrin蛋白变化情况;实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测miR-146a和促炎因子、纤维化因子表达情况.收集不同培养条件下HBZY-1细胞,检测miR-146a mRNA表达情况;利用转染技术,将miR-146a minics转染入高糖培养条件下的HBZY-1细胞中,检测miR-146a、Traf6、促炎因子和纤维化因子mRNA表达情况以及核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65蛋白变化情况.结果 与N组比较,DN组血糖(blood glucose,BG)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,SCr)和尿白蛋白肌酐比值(urine albumin creatine ratio,UACR)均明显升高,CT组BG、BUN、SCr和UACR含量降低,差异有统计学意义.肾脏病理切片和Western blot结果 均显示,与N组比较,DN组肾脏组织损伤,而CT组肾脏组织损伤缓解.实时定量PCR结果 显示,与N组相比,DN组miR-146a表达降低,促炎因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和纤维化因子转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)表达升高;而与DN组比较,CT组miR-146a表达则升高,细胞因子表达则降低,差异有统计学意义.分别用0、5μmol/L、15μmol/L和25μmol/L浓度姜黄素刺激HBZY-1细胞24 h后,miRNA-146a mRNA表达逐渐升高;分别用含有4.5 mmol/L(L-HC组)、15 mmol/L(M-HC组)和25 mmol/L(H-HC组)葡萄糖的培养液培养细胞,miRNA-146a mRNA表达逐渐降低.将miR-146a minics和negative control(NC)转染到高糖培养条件下HBZY-1细胞中,H-HC miR-146a组中,miR-146a mRNA表达明显高于H-HC miR-NC组,而H-HC组与H-HC miR-NC组之间差异无统计学意义;与H-HC miR-NC组比较,H-HC miR-146a组中靶基因Traf6和促炎因子(TNF-α和IL-1β)、纤维化因子(TGF-β和collagenⅠ)均降低,差异有统计学意义.H-HC miR-146a组中p65蛋白表达水平明显低于H-HC miR-NC组和H-HC组.结论 姜黄素通过促进miR-146a表达抑制NF-κB信号途径来缓解糖尿病肾病大鼠肾脏损.