ICR小鼠神经干细胞的体外培养与鉴定

摘要

目的建立一种简便、易行的ICR小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外分离培养方法。方法分离胚胎ICR小鼠的脑组织,用无血清培养基悬浮培养;倒置显微镜观察细胞形态;免疫细胞化学染色检测特异性标记物神经上皮干细胞蛋白(巢蛋白,nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE);CCK8法绘制生长曲线。结果从ICR小鼠胚脑组织分离的细胞,在无血清培养液中以神经球形式扩增,并可经消化后连续传代。生长曲线显示细胞倍增时间为2d。神经球内nestin阳性细胞率为(72.0±5.5)%。诱导分化后可观察到2种形态的细胞:一种具有长而粗的突起,交织成网,且GFAP阳性;另一种为胞体呈多边形、具有数个细长突起,NSE阳性。结论本方法培养的NSCs纯度高、增殖快,具有多向分化潜能,值得推广应用。