应用聚合酶链反应-膜芯片技术快速鉴定分支杆菌菌种

摘要

目的建立一种简便、快速、灵敏、特异的分支杆菌菌种鉴定方法.方法通过16S rDNA聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerase chain reaction-single stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)分析鉴定140株分支杆菌临床分离株;设计与合成用于鉴定分支杆菌菌种的16S rDNA寡核苷酸探针,制作膜芯片,与待测菌株生物素标记的16S rDNA基因PCR产物进行反向斑点杂交.结果140株分支杆菌临床分离株中,经16SrDNA PCR-SSCP初步鉴定,133株为结核分支杆菌复合群,7株为非结核分支杆菌.经膜芯片杂交分析,133株结核分支杆菌分离株鉴定为结核分支杆菌复合群;7株非结核分支杆菌中,1株鉴定为戈登分支杆菌,1株为土分支杆菌,1株为偶发分支杆菌,1株为胞内分支杆菌,另3株与分析探针杂交阴性.分析28种分支杆菌标准菌株和9种非分支杆菌菌株,结果显示寡核苷酸探针是特异的.结论16S rDNA PCR-膜芯片技术灵敏度高、特异性强、简便、快速,可用于鉴定分支杆菌菌种.