STING在膀胱癌患者组织表达及对IFN-γ/STAT1信号通路磷酸化修饰调控的机制研究

摘要

目的探究干扰素基因刺激蛋白(stimulator of interferon genes,STING)在膀胱癌患者中的表达及对干扰素信号通路干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)/信号传导及转录激活蛋白1(signal transducer and activator of transcription1,STAT1)的调控机制研究。方法队列试验:选取膀胱癌患者110例,收集癌组织及癌旁组织样本,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qPCR)法检测癌组织和癌旁组织STING表达水平。细胞学试验:采用CRISPR-Cas9技术敲除人膀胱癌BIU-87细胞STING基因,将膀胱癌细胞为3组,对照组、NC组(转染NC质粒)和试验组(转染CRISPR-Cas9质粒),MTT法检测在24 h,48 h,72 h不同时间点细胞的增殖能力,通过流式细胞技术检测各组细胞存活、早期凋亡和晚期凋亡比例,qPCR检测IFN-γ和STAT1 mRNA表达水平,Western blot法检测IFN-γ和STAT1蛋白表达水平,检测STAT1蛋白磷酸化修饰水平。结果队列试验:膀胱癌组织STING表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。细胞学试验:与对照组比较,敲除STING组细胞增殖能力降低,并且随着时间的延长增殖能力进一步降低(P<0.05);并且细胞存活降低,细胞早期凋亡和晚期凋亡比例增加(P<0.05);IFN-γ和STAT1 mRNA表达水平降低(P<0.05);IFN-γ和STAT1蛋白表达水平降低,并且STAT1磷酸化水平降低(P<0.05)。结论STING可能通过激活干扰素信号通路IFN-γ/STAT1的蛋白表达及磷酸化修饰参与膀胱癌的发生发展过程。