乳胶过敏原Hev b 3的克隆表达和纯化及其过敏原性检测

摘要

目的:克隆乳胶主要过敏原Hev b 3基因,构建其原核表达载体并表达和纯化重组蛋白,了解重组的Hev b 3是否具有和相应IgE特异结合的过敏原特性.方法:用RT-PCR方法从新鲜海南橡胶树叶提取的总RNA中扩增出Hev b 3的cDNA,将其克隆于原核表达载体pQE30质粒,转化大肠杆菌XL1-Blue,酶切和测序验证构建的载体,利用Ni-NTA柱层析纯化重组蛋白并用SDS-PAGE和Western Blot验证.结果:酶切和测序结果证实克隆了正确的Hev b 3序列,重组表达并纯化的蛋白具有和特异IgE抗体结合的过敏原特性.结论:成功构建了乳胶主要过敏原的原核表达载体,并纯化了具有过敏原特性的重组蛋白,为过敏原的标准化创造了条件.