幽门螺杆菌临床菌株的分离培养和鉴定

摘要

目的：建立一种幽门螺杆菌（H.pylori）临床菌株的分离培养的方法。方法：取临床胃黏膜组织标本88株,接种于10%绵羊全血的哥伦比亚选择性培养基上,37℃、5%O2、10%CO2、85%N2培养3-5 d后,挑取血平板上透明细小可疑菌落进行革兰氏染色和尿素酶试验,对阳性菌落进行扩大纯培养,提取细菌DNA,PCR扩增H.pylori 16sRNA、Cag A基因,电泳并进行测序鉴定。结果：成功从临床胃黏膜组织中分离培养出H.pylori,88例胃黏膜组织标本中分离培养并鉴定出H.pylori 19株,阳性率为22%;对16sRNA及Cag A基因进行扩增,电泳可见目的条带,并对16sRNA扩增产物测序,与H.pylori国际标准菌株26695比对,同源性为95%-99%。结论：37℃、5%O2、10%CO2、85%N2条件下10%绵羊全血的哥伦比亚选择性培养基上能成功分离培养出H.pylori临床株。