比较T7E1和Surveyor核酸内切酶对于点突变的检测效率

摘要

目的:比较T7E1和Surveyor核酸内切酶对于CRISPR-Cas9引起的点突变的错配剪切活性.方法:利用野生型和点突变的基因组DNA为模板,PCR扩增出突变位置的基因片段,用不同比例的野生型和点突变的PCR产物进行DNA杂交,分别用T7E1和Surveyor核酸内切酶对杂交后的产物进行切割,琼脂糖凝胶电泳分析结果.结果:当5％点突变DNA与95％野生型DNA杂交时,T7E1核酸内切酶剪切杂交产物的比例为9.5％,Surveyor核酸内切酶为3.2％;当点突变DNA与野生型DNA等比例杂交时,T7E1核酸内切酶剪切杂交产物的比例为45.6％,Surveyor核酸内切酶为26.4％;且T7E1和Surveyor核酸内切酶均能检测5％的突变DNA.结论:T7E1核酸内切酶检测点突变的效率高于Surveyor.