缺氧诱导因子-1α对人卵巢颗粒细胞KGN能量代谢的影响及作用机制研究

摘要

目的:探究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人卵巢颗粒细胞KGN能量代谢的影响及作用机制。方法:将KGN细胞随机分为KGN组(细胞不做任何处理),si-NC组(转染阴性对照si-NC)和si-HIF-1a组(转染siRNA si-HIF-1a)。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HIF-1a、线粒体DNA(mtDNA)及己糖激酶(HK2)的mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(western blotting)检测HIF-1α蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的增殖活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;细胞外通量分析仪测量细胞外酸化率;线粒体超氧化物(MitSOX)荧光染色检测各组细胞内的线粒体活性氧(ROS)含量;5,5’,6,6’-四氯-1,1’,3,3’-四乙基苯并咪唑基碳氰碘化物(JC-1)荧光染色检测各组细胞膜电位;三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测各组细胞内ATP含量。结果:低表达HIF-1a可以降低KGN的细胞增殖活力(P<0.01),增加细胞的凋亡率(P<0.01);同时细胞外酸化率显著增加(P<0.01),而糖酵解关键酶HK2表达显著下降(P<0.01);细胞内线粒体中ROS含量显著增加(P<0.01),相对膜电位及ATP含量显著下降(P<0.01)。结论:低表达HIF-1a降低KGN细胞糖酵解能力及上调线粒体ROS含量致线粒体受损,最终影响KGN细胞的生长。