单链TCR分子的构建与酵母表面展示

摘要

目的构建单链T细胞抗原受体(scTCR),借助酵母展示载体对其进行表达和展示,并确定优化的展示时间点。方法利用融合PCR(fusion PCR)通过linker将TCR分子两条链的可变区连接在一起,构建成scTCR,并克隆入展示载体pYD1;转化酵母细胞后,通过激光共聚焦显微镜观察scTCR的表达情况,并利用流式细胞仪测定其表达曲线;洗脱酵母细胞表面的蛋白质,通过点杂交检测进一步确定scTCR的表达。结果 scTCR被成功地构建和克隆;转化酵母细胞后,激光共聚焦检测表明其分布在酵母细胞的表面,流式细胞检测表明scTCR在诱导24 h左右在酵母细胞表面的展示比例达到峰值;对酵母表面洗脱蛋白的点杂交检测进一步表明了scTCR的表达和展示。结论所构建的scTCR能够有效地表达并展示在酵母细胞表面,为下一步构建scTCR酵母展示库并确定最佳的表达诱导和筛选时机奠定了良好的基础。