兰州百合DNA提取方法比较及RAPD体系的快速优化

摘要

以兰州百合鳞片和叶片为试材,采用改良CTAB法获得了高质量的基因组DNA.为优化兰州百合RAPD-PCR反应体系,利用正交试验设计,对兰州百合RAPD-PCR反应体系中的5种主要因素进行4水平共计16个组合设计,并选用3种反应程序,通过琼脂糖凝胶电泳结果分析,最终获得最佳反应体系为:20 uL反应体系中含30 ng模板DNA、0.5μmol/L随机引物、0.2 mmol/L dNTPs、2.25 mmol/L MgCl2,及1.5U Taq DNA聚合酶.最佳反应程序:94℃预变性4 min;94℃变性1 min,36℃退火1.5 min;72℃延伸2 min;35个循环;最后72℃延伸7 min.