熊果酸通过影响Bax和Bcl-2的表达诱导MCF-7人乳腺癌细胞凋亡

摘要

目的:探讨中药成分熊果酸(ursolicacid,UA)诱导MCF7人乳腺癌细胞的凋亡作用,并通过分析UA作用后的MCF7细胞Bax,Bcl2,cytochromec蛋白表达的变化,探讨其诱导MCF7细胞凋亡的分子机制.方法:采用细胞培养技术,用0,10,30和50μmol/L的UA处理MCF7细胞24h,用Ho染细胞,在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态变化.用0,20和50μmol/L的UA处理MCF7细胞24h,用PI染细胞,在流式细胞仪上测定细胞周期的变化.用0和50μmol/L的UA处理MCF7细胞24h,采用荧光免疫细胞化学SABCCy3法检测Bax,Bcl2,cytochromec蛋白表达,在荧光显微镜下拍照,用QWin图像分析软件测定Bax,Bcl2,cytochromec荧光灰度值.结果:用0,10,30和50μmol/L的UA处理MCF7细胞24h,随着UA浓度增加,在荧光显微镜下出现凋亡细胞增多,细胞呈现典型的凋亡形态学特征,核质浓集和凋亡小体.用0,20和50μmol/L的UA处理MCF7细胞24h,流式细胞仪检测亚G1峰比例分别为0.05,0.22,0.43与对照组5mL/LDMSO比较,50μmol/L的UA使MCF7细胞中的Bax灰度(59.3±7.8,213.6±7.4,P<0.01)和cytochromec灰度(88.2±6.9,188.1±15.4,P<0.01)增加,Bax/Bcl2灰度比值升高(1.0±0.1,2.4±0.4,P<0.01),Bcl2灰度(58.1±6.1,92.1±12.4,P<0.01)稍有增加.UA促进线粒体放释cytochromec进入胞质.结论:UA诱导MCF7细胞凋亡,其机制涉及到Bax/Bcl2比值升高引起线粒体释放cytochromec所依赖的凋亡调节信号通路.表明治疗乳腺癌,UA可能是有效的中药成分.