核糖体S6激酶对肝星状细胞内胶原表达的调控

摘要

目的:探讨核糖体s6激酶(p90RSK)调节肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原表达的作用.方法:将设计的p90RSK特异性siRNA克隆至真核表达载体pAV-U6+27中,构建p90RSK的RNA干扰真核表达载体pAV-RSKi.将构建的pAY-RSKi通过脂质体瞬时转染HSC-T6,分别采用实时定量聚合酶链式反应和Western Blot方法检测细胞的p90RSK和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达.将p90RSK的真核表达质粒(pMT2-RSK1)和pAV-RSKi分别与Ⅰ型胶原启动子荧光素酶报告基因质粒(pGL3-COL1A1)共转染原代HSC,48 h后检测细胞的荧光素酶活性.结果:构建的pAY-RSKi能够有效抑制HSC-T6中p90RSK mRNA和蛋白表达,与对照组相比较分别减少了(70.20±4.04)%和(89.10±5.26)%(P<0.01).HSC-T6中Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白的表达,与对照组相比较分别减少(61.80±3.96)%和(98.50±7.01)%(P<0.01).各组转染pMT2-RSK1,pAV-RSKi和空载质粒的HSC中,Ⅰ型胶原启动子活性之间的差异无统计学意义(P>0.05).结论:p90RSK参与了HSC中胶原的表达调控,可能成为肝纤维治疗的新靶点.