产紫杉醇内生真菌Fusarium maire的原生质体制备和再生

摘要

通过正交设计等实验方法,详细的研究了培养基成分、酶系组成、菌龄、渗透压缓冲剂、pH、酶解温度、时间和再生培养方式等多种因素对Fusarium maire原生质体制备和再生的影响.实验结果表明:将Fusarium maire通过先静止2 d再以180 r/min震摇2 d后,以0.6 mol/L的KCl配制的pH为5的复合酶(3 mg/dL溶壁酶、2.5 mg/dL蜗牛酶、1 mg/dL溶菌酶和0.5 mg/dL纤维素酶)中,32 ℃恒温酶解4 h,原生质体制备产量达3.2×107个/mL;纯化后的原生质体在25 ℃,以0.6 mol/L的蔗糖配制的YCM再生培养基上单层培养,其再生率达8.9%.为今后的通过原生质体融合和诱变研究,构建紫杉醇工程菌奠定了基础.