牛凝乳酶全长cDNA的克隆及其原核表达载体的构建

摘要

从小牛皱胃中提取凝乳酶(Chymosin)总RNA,经过RT-PCR获得凝乳酶 cDNA,纯化后与pMD-18T载体连接,转化大肠杆菌JM109,通过双酶切和序列测定,获得了凝乳酶全长基因序列.序列测定表明,凝乳酶全长核苷酸长度为1 143 bp,编码381个氨基酸.与GenBank上已发表序列NM_180994进行比较,核苷酸同源性为99.56%.将该基因片段克隆到原核表达载体pET-22b中,构建重组质粒pET-22b/Chymosin,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为凝乳酶的进一步表达奠定了基础.