人端粒酶逆转录酶基因反义核酸对CEM细胞系端粒酶活性的影响

摘要

为了探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide, ASODN)对CEM细胞端粒酶活性的影响,采用端粒酶聚合酶链反应-酶联免疫测定法检测CEM细胞的端粒酶活性,采用逆转录-聚合酶链反应方法检测hTERT基因mRNA的表达水平,以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化.结果显示: hTERT ASODN作用于CEM细胞后, hTERT mRNA表达水平明显降低; ASODN与CEM细胞共同孵育48小时,hTERT蛋白表达阳性率降为(40.43±2.07)%, 72小时hTERT蛋白表达阳性率降为(15.26±2.74)%,而hTERT正义核酸作用CEM细胞24,48,72小时,对hTERT mRNA及蛋白表达水平均无影响; hTERT基因ASODN作用于CEM细胞48,72小时,其端粒酶活性明显降低,分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比有显著性差异(P<0.05).结论:hTERT基因反义寡核苷酸能特异性地抑制CEM细胞的端粒酶活性.