α-1,2岩藻糖基转移酶基因35C＞T和682A＞G突变点体外表达的研究

摘要

本研究探讨35C＞T和682A＞G突变点对α-1,2岩藻糖基转移酶(FUT1)表达活性的影响.PCR扩增FUT1全长编码序列DNA片段,通过TOPO TA技术连接至表达栽体pcDNA3.1/V5-His,获取目的重组质粒.采用脂质体转染方法将重组质粒转染COS-7细胞,经G418筛选培养后,利用流式细胞术分析细胞表面H抗原,实时荧光PCR检测fut1 mRNA表达情况.结果表明:成功获取了35T、682G+35T和682A+35C重组质粒.转染2天后H抗原在COS-7细胞膜上表达,第4天达最高峰.与野生型(682A+35C)转染的细胞相比,第4天重组质粒(682G+35T)转染细胞H抗原的表达量仅为野生型的13.3%,而重组质粒35T转染细胞为野生型的52.7%.转染后fut1 mRNA水平随着时间延长而逐渐递减,在第1天重组质粒(682G+35T)转染细胞fut1 mRNA水平仅为野生型(682A+35C)的14%.结论:682A＞G突变明显降低α-1,2岩藻糖基转移酶活性,而35C＞T引起H抗原的表达部分下降.