四氢噻吩-3-酮还原酶的筛选与表征

摘要

通过基因挖掘技术获得一种来源于炭疽芽胞杆菌的短链脱氢酶BaCR1.它能够催化四氢噻吩-3-酮的不对称还原反应,进而合成碳青霉烯类抗生素硫培南的重要手性中间体(R)-四氢噻吩-3-醇.对BaCR1进行了催化性能表征,结果表明最适反应pH为7.0,最适反应温度为30℃,催化剂转化数(kcat)与米氏常数(KM)之比(kcat/KM)为0.25 L/(mmol·s).在100 mL的反应体系中,偶联葡萄糖脱氢酶用于辅酶再生,在底物上载量为50 mmol/L、重组大肠杆菌整细胞(干重)上载量为20 g/L的条件下,无需额外添加辅因子NADPH,反应24 h,转化率大于99％,还原产物的e.e.值为84％,实现了产物的克级制备,体现了酶法不对称还原制备(R)-四氢噻吩-3-醇的潜力.