非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究

摘要

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁.为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以Gen-Bank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表位进行预测分析,利用预测结果分析合成多表位融合基因P72(MeP72).再将MeP72经pMD19-T克隆后插入到原核表达载体pET-32a(+)中得到重组质粒pET-MeP72,双酶切验证在402 bp及5000 bp以上有条带,证明重组质粒构建成功.转化重组质粒pET-MeP72至大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达并优化诱导条件,分析重组蛋白反应原性.SDS-PAGE检测结果显示,MeP72重组蛋白的分子质量为30.74 kDa;Western blot分析显示MeP72重组蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其反应原性良好;小鼠免疫试验证实MeP72蛋白可诱导机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性.研究表明MeP72重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,并诱导机体产生特异性抗体,为诊断抗原的研发奠定了前期基础.