Qβ噬菌体A2基因的克隆与生物活性分析

摘要

[目的]通过基因重组技术构建Qβ噬菌体A2基因表达载体,并对其生理学活性进行分析.[方法]采用PCR技术从Qβ基因组中扩增A2基因,克隆到pBAD表达载体中构建pBAD A2重组质粒;对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析;转化宿主细胞JM109,SDS-PAGE检测Arabinose诱导后A2蛋白的表达;光电比浊法测定大肠杆茵生长曲线鉴定pBAD A2在不同宿主细胞中的溶菌性.[结果]经菌落PCR筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pBAD A2构建成功,并在JM109中获得高表达,其表达水平随Arabinose的浓度增加而增高,Arabinose在0.2%时达到高峰.OD660显示pBAD A2具有溶菌性,可快速溶解大肠杆菌JM109、HB101和594,而对BE110没有溶解活性.[结论]构建成功高效表达A2蛋白的重组载体pBADA2,表达的蛋白具有良好的溶菌性,为新型抗菌药物开发奠定了理论和实践基础.