白芍总苷对HaCaT细胞外泌体的影响及机制研究

摘要

目的 探讨白芍总苷对HaCaT细胞增殖、侵袭、迁移能力及外泌体释放的影响与可能机制。方法 采用50、100、200μg/L白芍总苷处理HaCaT细胞(分别设为低剂量组、中剂量组、高剂量组),同时设对照组(加入等量完全培养液)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组不同时点的细胞增殖能力;采用Transwell小室实验检测细胞迁移能力、侵袭能力;培养24 h,高速离心提取外泌体,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、CD63及CD81的蛋白表达量,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中CyclinD1、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K的mRNA表达量。结果 培养0、24 h时,4组细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时,细胞增殖抑制率由高至低排列依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。迁移细胞、侵袭细胞数量由低至高排列依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。CyclinD1、CD63、CD81、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白表达量和CyclinD1、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K mRNA表达水平由低至高排列均依次为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 白芍总苷能够抑制HaCaT细胞外泌体分泌,并抑制HaCaT细胞增殖、侵袭及迁移能力,其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。