自噬在葛根素促成骨细胞分化调节中的作用

摘要

目的 探讨自噬在葛根素调节hFOB1.19人成骨细胞分化过程中的作用.方法 将成骨细胞分为A组(成骨分化诱导组)、B组(A组+10-8 mol/L葛根素3 h)和C组[B组+5 mmol/L自噬抑制剂3-甲基嘌呤(3-MA)1 h].采用碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色检测成骨细胞的分化及钙化;透射电镜检测成骨细胞内自噬小体的改变情况;免疫荧光染色检测自噬微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)在细胞内的分布情况;Western blotting检测成骨细胞内成骨分化和自噬相关蛋白的表达情况.结果 ALP和茜素红染色显示,葛根素(10-8 mol/L)能够明显促进成骨细胞的分化,加入3-MA后葛根素的促成骨细胞分化作用受到抑制;葛根素促进成骨细胞自噬小体增加,3-MA抑制自噬小体增加;免疫荧光显示葛根素促进LC3-Ⅱ在细胞核表面的聚集,加入3-MA后,这种现象被抑制;葛根素促进成骨分化蛋白矮小相关转录因子2(RUNX 2)、骨保护素(OPG)和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、BECLIN 1的表达,3-MA抑制LC3-Ⅱ和BECLIN 1的表达.结论 葛根素通过自噬调节成骨细胞分化.