肠道病毒A71型结构蛋白和非结构蛋白对p85表达及p38途径活化的影响

摘要

目的探讨肠道病毒A71型(EV-A71)结构蛋白和非结构蛋白对p85表达和p38途径活化的影响。方法通过RT-PCR扩增EV-A71的12个基因片段,经酶切反应和连接反应将目的片段连接到pcDNA3.1(+)/myc-His A真核表达载体,制备去内毒素的重组质粒;使用SuperFect转染试剂将2μg重组真核质粒转染至HEK293细胞24h后,免疫印迹检测p85表达和p38的磷酸化。结果正确构建12个EV-A71结构蛋白和非结构蛋白的真核重组质粒;与未转染细胞相比,EV-A71 P1区结构蛋白(VP1、VP3和VP4)、P2区非结构蛋白(2A、2B、2C和2BC)和P3区非结构蛋白(3A、3C、3D和3AB)均能不同程度的改变p85的表达和p38的磷酸化水平;EV-A71结构蛋白VP2虽不能显著提升p85的表达,但能提升p38的磷酸化水平。结论EV-A71的12个亚单位蛋白可与宿主细胞发生互作,进而调控宿主细胞的生物学过程。