稀释复性法体外复性重组牛凝血酶原-2包涵体

摘要

对重组牛凝血酶原-2包涵体的体外重折叠复性进行了研究.凝血酶原-2是α-凝血酶生成过程中的一个最小的单链中间前体.重组牛凝血酶原-2在E.coli中高效表达并形成包涵体,经2 5mol.L-1脲和0.7% Triton X-100洗涤,再用8 mol.L-1脲和0 3 mol.L-1 DTT溶解后,得到了包涵体裂解液.研究优化了体外复性溶液,其组成为含2.7 mol·L-1脲、0.6 mmol·L-1 GSSG、GSSG/GSH 0.9、0.1%PEG6000和0.5 mol·L-1 L-Arg、pH 7.4 Na3PO4缓冲液.牛凝血酶原-2复性后经透析,再被Echis Carinatus Snake Venom激活,转化为有活性的α-凝血酶,其总活力可达2948 U·mL-1.结果表明稀释复性法可用于重组牛凝血酶原-2包涵体的体外重折叠复性.