人Endostatin cDNA的克隆及其在HT1080细胞中的表达

摘要

目的:构建能表达人Endostatin的真核表达质粒.方法:设计引物从成人肝cDNA文库中通过PCR扩增到Endostatin cDNA,并在5′端融合编码人胰岛素信号肽序列,经测序证实后连接到真核表达载体pcDNA3.1(-)中.将携带基因的真核表达载体质粒pcDNA3.1(-)/SEND转染HT1080细胞后用G418筛选获得克隆,采用RT-PCR和Western-blot检测Endostatin的表达.结果:测序结果表明克隆的人Endostatin cDNA完全正确,并且在其5′端融合编码人胰岛素信号肽序列;RT-PCR显示转染后的HT1080细胞可以有效地转录Endostatin mRNA;Western-blot检测到转染后的HT1080细胞上清有相应的蛋白质,大小为20kD左右.结论:含有人胰岛素信号肽序列的人Endostatin cDNA重组质粒pcDNA3.1(-)/SEND转染HT1080细胞后可以有效的表达目的蛋白并能分泌到细胞外,本研究为Endostatin的功能研究及应用于基因治疗提供基础.