小鼠胚胎成纤维细胞条件培养液的蛋白质组学初步分析

摘要

目的:运用双向电泳、质谱技术对小鼠胚胎成纤维细胞饲养层条件培养液进行蛋白质组学分析,寻找其中可能具有抑制分化作用的蛋白因子.方法:用60Co γ-射线照射昆明白小鼠胚胎成纤维细胞,制成饲养层,置于ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒钠盐)培养液中培养24h,收集条件培养液.用冷冻干燥、凝胶过滤层析、冷丙酮沉淀的方法从条件培养液中提取蛋白质样品,经双向电泳和银染得到双向电泳图谱,用Image master elite 2.0软件进行图像分析.取蛋白点进行酶解,再用CapLC-ESI-Q-TOF质谱进行分析,使用Mascot软件在NCBInr数据库中进行搜索.结果:双向电泳得到(221±67)个蛋白点的银染图谱,初步分析鉴定13个蛋白点.结论:昆明白小鼠胚胎成纤维细胞条件培养液中含有β-半乳糖苷结合蛋白、半胱氨酸富集的酸性分泌蛋白(SPARC)等成分.