Poly d(GC)在负超螺旋下形成的Z-DNA

摘要

为建立一个生理状态下的左旋DNA(Z-DNA)模型,本文以pMD18-T质粒为母本质粒,将含有d(GC)_6、d(GC)_8、d(GC)_(10)、d(GC)_(13)等poly d(GC)片段的特殊序列插入到pMD18-T质粒中,构建了poly d(GC)重组质粒。这些poly d(GC)重组质粒处于负超螺旋状态。甲基化抑制实验证实,这些插入到质粒中的poly d(GC)能够形成潜在的Z-DNA构象。同时,为进一步验证poly d(GC)重复的长度与形成Z-DNA效率的关系,原核表达并亲和层析纯化了鲫鱼PKZZα多肽(P★)。凝胶阻滞实验分析了d(GC)_6、d(GC)_8、d(GC)_(10)、d(GC)_(13)4种重组质粒与P_(Zα)的亲和性。结果显示,P_(Zα)对这4种重组质粒的迁移都能产生阻滞效应,并且随着GC的增多,阻滞效应越明显。说明d(GC)越多,poly d(GC)形成Z-DNA的能力越强。