泛素E3连接酶TRIM10在心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用及机制

摘要

目的:探讨泛素E3连接酶TRIM 10在心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用及机制.方法:培养原代的SD大鼠乳鼠心肌细胞,siRNA-TRIM 10与Ad-TRIM10转染细胞48 h,再加入缺血缓冲液复制心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型(缺氧30 min,复氧24 h).转染siRNA-TRIM 10敲低其表达的实验分为四组:siRNA-Scramble组(转染空白对照siRNA)、siRNA-TRIM 10组(转染siRNA-TRIM 10)、H/R+si-Scramble组(转染siRNA-Scramble 48 h,进行H/R处理)和H/R+ siRNA-TRIM 10组(转染siRNA-TRIM10 48 h,进行H/R处理);转染Ad-TRIM10使其高表达分组同上(Ad-GFP作为对照).DHE染色观察细胞氧化应激情况;TUNEL染色观察细胞凋亡情况;Western blot检测TRIM 10、BAX、p-P38/P38MAPK、p-JNK/JNK及p-ERK/ERK蛋白的表达水平.结果:与Control组相比,H/R组心肌细胞中ROS的产生增加了5.8％、凋亡的发生增加了7.9％、p-JNK和p-P38MAPK蛋白的表达分别增加了21.8％和47.1％(n=5,均P＜0.05),siRNA-TRIM 10敲低其表达,减轻H/R处理引起的以上改变;过表达Ad-TRIM10进一步加重H/R处理引起的上述改变,与H/R组相比,过表达TRIM10+H/R组细胞ROS的产生增加了12.3％、凋亡的发生增加了15.6％、p-JNK和p-P38MAPK蛋白的表达分别增加了26.8％和25.7％(n=5,均P＜0.05).结论:E3连接酶TRIM 10加重心肌细胞缺氧/复氧损伤,其机制可能通过p-JNK/p-P38MAPK途径介导.