应用流式细胞技术检测不同方法处理的脾组织CD3含量

摘要

流式细胞技术因操作简便、重复性好、结果可靠,已在免疫学和分子生物学等研究中得到广泛的应用。但流式细胞技术要求标本必须在短时间内新鲜制备,并快速标记抗体,这不利于大批量标本的流式细胞技术测定。本文应用流式细胞仪分别测定液氮速冻脾组织和新鲜脾组织中T淋巴细胞(CD3)的含量,旨在探讨能否应用流式细胞仪对液氮速冻组织进行细胞免疫与分子生物学研究。1材料和方法1.1实验动物健康成年ICR小鼠15只,雄性,体质量20g,由首都医科大学实验动物科学部提供。1.2方法1)将小鼠断椎处死,开腹取出脾脏并分为2段:一段组织放入1mL冷凝管中,入液氮骤冷后置-20℃冰柜保存2周,制备脾细胞悬液(A组);另一段组织快速放入生理盐水中,即刻制备脾细胞悬液(B组)。2)脾单细胞悬液制备[1,2]:用生理盐水冲洗新鲜脾组织(B组)表面,用眼科剪将脾组织剪碎,加入1mL0.01mol/L pH7.2～7.4的PBS中,经300目滤网过滤制成单细胞悬液,调整单细胞悬液细胞数至1×106个/mL。液氮速冻脾组织(A组)放入37℃生理盐水中速溶,然后按相同方法制成单细胞悬液。3)流式细胞仪测定脾单细胞悬液CD3含量:取单细胞悬液100μL加入流...