基于ATP5G3研究丹参素改善缺氧/复氧心肌细胞能量代谢障碍的作用机制

摘要

目的 研究丹参素改善缺氧/复氧(H/R)心肌细胞能量代谢的作用机制.方法 将培养的H9C2心肌细胞分为对照组,模型组和丹参素低、中、高剂量组5组.对照组在正常条件下以完全培养基持续培养7 h;其余4组氧糖剥夺模式进行缺氧、缺糖刺激4 h后,恢复正常条件培养3 h,其中丹参素各剂量组的完全培养基中分别含有浓度为1、10、20 μmol/L丹参素.采用CCK-8法检测心肌细胞活力,采用ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)含量,在丹参素各剂量组中筛选丹参素的最佳浓度,作为最佳剂量组.之后采用JC-1法检测线粒体膜电位(MMP),荧光法检测线粒体膜通透性转换孔(mPTP)开放程度;采用蛋白免疫印迹法检测ATP5G3的蛋白表达水平,RT-PCR法检测ATP5G3的基因表达水平.结果 与对照组比较,模型组细胞活力下降,LDH释放增加;经丹参素干预后,丹参素中、高剂量组细胞活力上升、LDH释放减少,丹参素中、高剂量组两组间差异无统计学意义,选取丹参素中剂量组作为最佳剂量组;与对照组比较,模型组ADP/ATP增加,线粒体MMP下降,mPTP过度开放,ATP5G3 mRNA表达上调,ATP5G3蛋白表达上调,差异具有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,丹参素中剂量组ADP/ATP减少,线粒体MMP上升,mPTP过度开放被抑制,ATP5G3 mRNA表达下调,ATP5G3蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 丹参素具有改善H/R心肌细胞能量代谢、减轻细胞损伤的作用,其作用机制可能与调节ATP5G3表达有关.