人TFAR19的定点突变及其重组蛋白的表达、纯化和功能分析

摘要

目的 :了解凋亡相关新基因TFAR19编码蛋白分子中潜在的Ser10 0 磷酸化位点与其促凋亡效应的关系。方法 :利用重叠延伸PCR定点突变技术构建TFAR19Ser10 0 →Ala10 0 突变体 ,用DNA测序技术验证 ,大肠杆菌表达 ,离子交换技术纯化重组突变蛋白 ,将其加入培养的白血病细胞株HL 6 0 ,通过PI染色 ,流式细胞仪分析 ,观察突变重组蛋白的促凋亡效应。结果 :构建成TFAR19Ala10 0 突变体 ,并经DNA测序所证实 ,在大肠杆菌中获得了高水平表达 ,Westernblot表明突变型重组蛋白与野生型具有相同的免疫学活性 ,流式细胞仪分析发现突变蛋白对撤除血清的HL 6 0细胞具有与野生蛋白相似的剂量依赖性促凋亡效应。结论 :TFAR19分子中潜在的Ser10 0 磷酸化位点对其促凋亡效应无影响 。