丫啶橙-碘化丙啶双染色法观察大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性

摘要

目的 探讨大鼠耳蜗基底膜毛细胞活性鉴别的实验观察方法.方法 采用丫啶橙-碘化丙啶(acridine orange-propidiumiodide,AO/PI)双染色法,荧光显微镜观察,检测经组织培养后新生大鼠耳蜗基底膜毛细胞的活性.结果 在激发光下染色后的活细胞核是亮绿色,失活细胞核呈橙红色.当染液pH为6.5,AO浓度为0.1‰时,细胞染色不足,浓度超过1.5‰时,出现"过染",最适染色浓度为1‰;当1‰AO的pH值低于5.0时毛细胞蒙上红晕,背景模糊,当pH值高于7.4时,不能区分死亡细胞与活细胞,pH值6.5～7.0时,染色效果最好.结论 用pH为6.8的1‰AO、0.1‰PI染色,可清晰分辨死/活细胞.