深海细菌Pseudomonas sp.bIp-2黑色素生成条件研究及其hppD基因的克隆

摘要

从大西洋深海沉积物中分离得到1株产黑色素细菌b Ip-2,16S rRNA基因序列分析表明该菌隶属于假单胞菌属（Pseudomonas）,与施氏假单胞菌（P.stutzeri）有最高的16S rRNA基因序列相似性（99%）.进一步对该菌的生长及产黑色素条件进行了初步研究,结果表明b Ip-2在稳定生长期后期才开始大量积累黑色素;b Ip-2可在4～37℃的温度范围下生长,最适生长温度为37℃,在28℃具有最高的黑色素产量;b Ip-2生长的pH范围偏碱性,在p H=7的最适生长条件下黑色素产量最高,同时碱性环境有利于黑色素的快速形成;b Ip-2可以在1%～9%的NaCl浓度范围中生长,在5%的NaCl浓度下具有最高的黑色素产量;低浓度的Fe2＋（0.05 mmol/dm3）可以提高黑色素的产量,Fe2＋浓度≥0.20 mmol/dm3时明显抑制黑色素的生成,而Fe2＋浓度为1.00 mmol/dm3时可完全抑制菌株的生长;低浓度的Cu2＋（0.1 mmol/dm3）对黑色素的产量无明显影响,Cu2＋浓度≥0.5mmol/dm3时可抑制黑色素的生成,而Cu2＋浓度超过1.0 mmol/dm3时可完全抑制菌株的生长.通过PCR扩增获得菌株b Ip-2的对羟苯基丙酮酸双加氧酶（hydroxyphenylpyruvic acid dioxygenase,HPPD）全长基因（1087 bp）,分析发现其编码的HPPD蛋白序列（含361氨基酸）与来自菌株Pseudomonas stutzeri RCH2的HPPD蛋白序列具有最高的同源性（序列相似性为97%）.这些结果为深入研究该细菌所产黑色素的合成,应用及生态作用奠定了基础.