辣椒组织总RNA两种提取方法比较及qRT-PCR验证

摘要

目的:探索提取高质量的辣椒不同组织总RNA的方法,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证。方法:以1年生辣椒(Capsicum annuum)的根、下胚轴、茎、叶、顶端分生组织、花和果实为实验材料,比较改良Trizol Reagent试剂法和RNAprep Pure试剂盒法对辣椒组织总RNA的提取效果。以改良Trizol Reagent试剂法提取的辣椒不同组织总RNA为模板,反转录成cDNA的第一条链;通过RT-PCR和qRT-PCR,研究甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的扩增和自我修剪基因(SELF-PRUNING,CaSP)的组织表达。结果:Trizol Reagent提取的总RNA,28 S和18 S条带较亮,OD_(260)/OD_(280)比值为1.82~2.07;RNAprep Pure提取的总RNA,28 S和18 S条带较暗,OD_(260)/OD_(280)比值为1.93~2.15;Trizol Reagent提取的总RNA能扩增出CaGAPDH基因片段,目的基因CaSP在不同组织中表达水平不同,在根和花中表达更高。结论:Trizol Reagent提取的总RNA,完整性和纯度均较好,得率也较高,能满足后续的分子实验要求。Trizol Reagent试剂法是提取高质量辣椒不同组织总RNA的较好方法。