pGEX-4T-2-A表达系统的构建及其融合蛋白GST-PlaA的表达优化

摘要

构建pGEX-4T-2-A表达质粒来获得融合蛋白GST-PlaA.PCR扩增粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因PlaA,定向克隆到pGEX-4T-2载体上.重组质粒转化至大肠杆菌JM109菌株中,进行阳性克隆的筛选并测序.将测序正确的质粒转化到表达菌株BL21（DE3）PLysS中,经IPTG诱导并进行SDS-PAGE分析,验证融合蛋白GST-PlaA的表达,同时优化培养条件.pGEX-4T-2-A表达质粒构建成功,其融合蛋白GST-PlaA以包涵体形式表达.在OD值为0.8时加入终浓度为0.5mM的IPTG,37℃诱导8h时,融合蛋白GST-PlaA表达量最高.为磷脂酶A1蛋白的纯化与功能研究奠定了基础.