人Api6融合蛋白原核表达系统的构建

摘要

目的：本研究拟采用蛋白原核表达的方法,诱导表达人Api6（Apoptosis inhibitor 6）融合蛋白,为进一步研究Api6在凋亡抑制、脂质代谢和肿瘤发生中的作用奠定基础。方法：利用PCR技术扩增人Api6基因,将其克隆至原核表达载体ppSUMO,构建重组质粒ppSUMO-Api6;重组质粒转化原核表达宿主菌E.coli Rosetta感受态;采用蛋白原核表达的方法,不同诱导前菌液浓度,不同温度、不同异丙基硫化半乳糖苷（Isopropy1-β-D-thiogalaotopyrano-side,IPTG）浓度、不同诱导时间,筛选诱导表达Api6重组蛋白的最优条件;Western blot鉴定其表达情况。结果：成功构建重组质粒ppSUMO-Api6;成功诱导Api6重组蛋白的原核表达,表达的最优条件为：OD600=0.5~0.8的重组菌,16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导16 h。结论：含有人Api6 cDNA全长序列的重组质粒ppSUMO-Api6,经转化原核表达宿主菌E.coli Rosetta感受态细胞,在诱导前菌液OD600=0.5~0.8、16℃、0.5 mmol/LIPTG、诱导16 h这一优化的诱导条件下,重组菌ppSUMO-Api6-Rosetta可诱导重组蛋白ppSUMO-Api6的原核表达。