龙牙百合DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立

摘要

[目的]研究龙牙百合总DNA的提取方法,建立优化的ISSR-PCR反应体系和程序,为种质资源研究奠定基础.[方法]利用改良的CTAB法提取龙牙百合基因组DNA,并对影响ISSR扩增反应的各因素进行优化.[结果]获得了高质量的龙牙百合基因组DNA;优化的龙牙百合ISSR-PCR反应体系为,25 μl体系中含60 ng模板DNA,0.4 μmol/L ISSR引物,2.0 mmol/L Mg2+,1.5 U Taq酶,0.2 mmol/L dNTPs;反应程序为,94 ℃预变性5 min;然后进行40个循环:94 ℃变性50 s, 52 ℃复性45 s,72 ℃延伸75 s;循环结束后72 ℃延伸8 min.[结论]建立了适合于龙牙百合的ISSR-PCR反应体系及程序,为种质资源研究奠定了基础.