布鲁氏菌新型疫苗的构建表达和免疫原性检测研究

摘要

[目的]探讨布鲁氏菌新型疫苗的构建表达和免疫原性检测.[方法]该研究所选的L7/L12核蛋白为公认的T细胞保护性抗原.它具有高度的保守性.通过试验,验证17.3 kDa蛋白是否具有保护作用.同时,对翻译起始因子3蛋白进行抗原预测.[结果]从布鲁氏菌中提取其全基因组DNA,测序正确后分别克隆至原核表达载体PET32a(+)上,经诱导表达出相应的重组蛋白,WB鉴定后纯化待用;同时,编码基因克隆至真核表达载体PCDNA3.1(+)上,将重组质粒转染COS-7细胞后经WB证实重组质粒构建成功.将重组蛋白混合弗氏佐剂免疫动物,同时DNA疫苗以PUMVC1-mGM-CSF重组质粒为佐剂(各100μg/只)肌肉免疫动物;每15 d免疫1次,加强免疫3次后检测免疫应答指标,并且进行组间比较.采取ELISA法检测到较高滴度的特异性抗体,WB也证实特异性抗体的产生.[结论]该研究成功构建了布鲁氏菌基因工程疫苗,在国内尚属首次.利用流式细胞仪的分型技术和ELI SPOT法评价布鲁氏菌疫苗的细胞免疫指标,将促进我国兽用疫苗及相关产品的实验室质控标准方法的建立和发展,为其临床应用奠定基础.